流式细胞术-流式细胞术实验步骤

流式细胞术的基本原理？

原理：根据激发光的强弱，来判断细胞和染色物质的结合情况，从而得到要检测的结果。

1.

将待测细胞染色后，制成单细胞悬液。

2.

用一定压力将待测样品压人流动室，同时不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

3.

流式细胞仪通常以激光作为发光源，经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光信号和荧光信号。

流式细胞仪原理？

流式细胞仪的工作原理是：将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。对分选出的细胞可以进行培养或其它处理，做更深的研究。

流式细胞仪检测有个设门法.怎样设门？

所谓的门，在流式细胞仪检测的时候术语叫做gate。流式细胞仪是针对细胞（后者颗粒）的群来做研究的。往往是先选中感兴趣的一个细胞群，再分析下一步的染色，可以进行很多分级。

比如先从所有细胞中画出淋巴细胞，可以在FSC-SSC散点图上画出淋巴细胞的群，比如一个方框，或者任意曲线的gate，也就是所谓的门。把淋巴细胞括在内。然后在另外一个散点图上只显示这个gate里的细胞，但是把横坐标和纵坐标改为其他荧光标记。总之，门就是一个选择细胞群的手段。

流式细胞仪的原理是什么？

流式细胞仪是一种分析和筛选细胞的工具，其原理是将细胞悬浮液通过一个细长的注射管，使其在一个窄的光束中流动，并通过流式细胞仪中的激光束。

当细胞流过激光束时，细胞中的染色质或标记物会发生光散射和荧光信号。这些信号被收集并转换成电信号，通过计算机处理和分析得到细胞的数量、大小、形态和表面标记。

通过这种方式，流式细胞仪不仅可用于检测细胞数量、分子分布和活性等，还可利用分选系统实现细胞的分选和分离。

流式细胞来不及上机可以放多久？

流式细胞在上机之前可以放置一段时间，但时间不宜过长。一般情况下，流式细胞可以在4°C的冰箱中保存数小时至一天。如果需要更长时间的保存，可以将细胞悬浮液冷冻在液氮中，或者使用专门的冷冻保存液进行冷冻保存。然而，长时间的保存可能会导致细胞的质量下降，因此尽量在上机前尽快处理流式细胞以确保最佳结果。